T7 RNA Polymerase, HQ (high quality)是一種可用于基礎研究的產品,用于制備非臨床試驗的醫藥品原藥、開發符合GMP指南的醫藥品制造工藝以及開發RNA藥物等。本產品的終反應液中,不含人或動物源性成分以及β內酰胺類化合物。
本酶具有與T7 RNA Polymerase ver.2.0(Code No. 2541A)同等的性能,且能夠以含有T7啟動子序列的雙鏈DNA為模板,以NTP為基質,通過轉錄啟動子下游區域,在體外合成單鏈RNA。與附帶的反應緩沖液(10X IVT Reaction Buffer, HQ)配合使用時,可大量制備高質量的RNA,適用于RNA醫藥領域的研發。
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■ HQ級別品質
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本產品的終反應液中,不含人或動物源性成分以及β內酰胺類化合物。
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■ 保存
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-20℃。
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■ 起源
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Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase
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■ 性質
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1. 分子量:約99.8 kDa
2. 輔因子:Mg2+
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■ 活性定義
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在37℃條件下,1小時內生成0.5μg的1.9kb FLuc RNA所需的酶量定義為1個活性單位(U)。
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■ 用途
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1. 合成RNA,用于酶的帶帽結構
2.合成基于Cap analog帶帽結構的mRNA
3.長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA)的合成
4.向導RNA(guide RNA)的合成
5.siRNA前體的合成
6.用于RT-qPCR的RNA標準模板的合成
7.高特異性RNA探針的合成
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■ 使用注意
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1. 請勿劇烈攪拌本酶。
2. 當dsDNA模板、試劑、試管或微量移液器槍頭被RNase污染時,合成的RNA產量會降低或者出現片段化。在實驗過程中應采取預防措施以避免RNase污染,例如戴一次性手套和使用專門用于RNA實驗的試管和微量移液器槍頭。
3. 為合成長度均等的RNA,可將含有T7啟動子的線性化質粒或PCR產物等作為DNA模板來使用。理想的線性化模板末端應為5’-突出或平端。
4. 高質量10×IVT Reaction Buffer含有亞精胺。亞精胺與核酸形成復合體,在某些情況下可能產生沉淀,因此模板DNA應在加酶之前即倒數第二步再加入反應體系中。
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