PrimeScript FAST RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因組DNA進行Real Time RT-PCR反應的專用反轉錄試劑。試劑盒中使用了具有較強DNA分解活性的gDNA Eraser,42℃,2 min即可除去基因組DNA,之后添加含有完全抑制DNA分解活性成分的反轉錄反應試劑,進行10分鐘的反轉錄反應。由于基因組去除試劑和反轉錄反應試劑預先進行了預混化,因此,通過向RNA樣品中依次添加試劑的簡便操作,可以毫無損失地進行從基因組DNA去除到cDNA合成的反應。
本試劑盒尤其適用于存在基因組殘留問題的Real Time RT-PCR分析,例如無法設計合適引物的單外顯子基因或沒有大內含子的基因,以及由于假基因的存在無法避免基因組來源的非特異性擴增時。
使用本制品合成的cDNA適用于嵌合熒光法和探針法qPCR分析。可以根據實驗目的,選擇與TB Green® Premix Ex Taq? II FAST qPCR(Code No. CN830S/A)、TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 、Probe qPCR Mix, with UNG (Code No. RR392S/A/B)等定量PCR試劑組合使用。
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■ 保存
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-20℃。
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■ 特長
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1. 在短短15分鐘內完成從去除基因組DNA到cDNA合成的反應。
2. 只需依次添加預混試劑的簡便操作,即可進行反應。
3. 通過單管反應可以從模板RNA中毫無損失地合成cDNA。
4. Random 6 mers和Oligo dT Primer作為反轉錄引物,預先包含在5X RT Premix中,可以均勻地合成RNA的全部區域。
5. 本制品中附加了標準曲線制作用稀釋液EASY Dilution II(for Real Time PCR),將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時也能夠進行準確稀釋,容易在寬廣范圍內獲得準確定量的標準曲線。
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■ 使用注意
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1.使用本制品合成的cDNA與TB Green關聯制品組合使用時,建議使用以下TB Green Premix系列。
與本制品組合使用,可以得到可信度高的結果。
TB Green Premix Ex Taq II FAST qPCR(Code No. CN830S/A)
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)
本制品與TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 組合使用時,有時反應性能不好,不推薦使用。
2.8X gDNA Eraser Premix和5X RT Premix前在使用前需顛倒混勻,輕輕離心后使用。
3.分裝試劑時務必使用新的槍頭(Tip),以防止樣品間污染。
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