高安全性、高效價的慢病毒包裝方案新選擇
2022-08-12文章來源：takarabiomed
新品┃高安全性、高效價的慢病毒包裝方案新選擇
慢病毒是一種可用于在包含原代細胞、干細胞、神經細胞等非分裂細胞在內的哺乳動物細胞中進行基因導入的多用途工具。
Takara推出的新品LVpro? Packaging Mix with pLVpro系列載體可以幫助你獲得高安全性、高效價的慢病毒。
■產品介紹
LVpro Packaging Mix是經過優化的質粒混合物，高效表達慢病毒制備所需要的成分，可包裝生產高滴度重組慢病毒。 pLVpro vector是tat非依賴性第三代慢病毒載體，其中5’LTR的U3區域被CMV啟動子取代，并且在不影響感染滴度的情況下刪除了包裝信號附近的HIV來源序列。 將pLVpro vector和LVpro Packaging Mix共轉染Lenti-X 293T細胞，包裝質粒瞬時表達Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白，這有助于將重組病毒RNA（從pLVpro慢病毒載體轉錄而來）包入完整的病毒粒子中。使用這種經過優化的包裝質粒混合物和高效轉染Lenti-X 293T細胞的轉染試劑Trans IT-Virus-GEN（Mirus Bio, Code No. MIR 6700）或Trans IT-293（Mirus Bio, Code No. MIR 2700），可以獲得高滴度的重組慢病毒，而且在多數情況下，該病毒可用于直接感染靶細胞，而不需要事先進行濃縮處理。
■產品特點
·HIV-1 tat非依賴性第三代慢病毒載體
·臨床使用可能，將HIV-1來源序列排除到極限，提高安全性
·優化了包裝系統，制備高滴度慢病毒粒子
·和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector組合使用可進行P2實驗（注：取決于插入基因）
■實驗例1LVpro Packaging Mix和其他品牌同類試劑盒制備的慢病毒滴度比較
將表達ZsGreen1的慢病毒載體和包裝質粒共轉染Lenti-X 293T細胞制備重組慢病毒，使用HT-1080細胞評估其生物學效價。與全部使用A公司產品的場合【1】相比，部分使用Takara產品的場合【2、3】得到的慢病毒滴度要高出10倍。另外，在全部使用Takara產品的場合【4】得到慢病毒滴度是
最高的。
■實驗例2兩種慢病毒基因導入方法比較：RBV-Spin法 vs Polybrene法
使用LVpro Packaging Mix制備表達ZsGreen1的慢病毒并進行30倍稀釋，然后分別通過RetroNectin（Code No. T100A）的RBV（RetroNectin Bound Virus）-Spin法或Polybrene法對人外周血單核細胞（PBMC）進行基因導入，比較這兩種方法的轉導效率。
感染3天后回收細胞，測定ZsGreen1陽性細胞率。結果顯示，Polybrene法的陽性率為10%左右，而RBV-Spin法的陽性率在20%以上，與Polybrene法相比顯示出較高的陽性率。
■產品列表
