RNAscope原位雜交技術
2021-09-01文章來源：bio-techne
導 語：
RNAscope是一種新型 RNA原位雜交技術，基于其獨特的探針設計與背景抑制技術，并且融合傳統RNA原位雜交技術與FISH技術的優點，使單個RNA的轉錄變得可視化，是目前最精準的RNA檢測技術。
技術介紹：
RNAscope®是一項用于檢測位于完整細胞中目標RNA的定量原位雜交（in situ hybridization , ISH) 的新技術。該技術以其能放大特異性信號而非噪音信號的專利探針引物設計方法，代表了RNA原位雜交（ISH）領域一項重大進步。
RNAscope® 探針引物設計與信號放大原理
為了能夠顯著提高RNA原位雜交ISH的信號噪聲比，RNAscope®采用了一項原理已被證實的十分類似于熒光共振能量轉移（FRET）的設計原理。兩個獨立的引物探針 (Z形引物對) 需要隨機與目標序列互補結合，以實現信號放大。因為兩個獨立引物相互緊挨同時相互互補結合到一個非目標序列的可能性非常之小，這種設計原理保障了對目標信號的特異性放大。
對于任意一個目標RNA序列，都有一組獨特設計的20對Z形引物探針對只針對該目標序列具有互補雜交特異性，而不會結合到非目標片段上。
RNAscope®引物探針設計與信號放大系統的優勢
靈敏度：每三對Z形引物對足以實現對于單一RNA分子的檢測。在部分RNA段落不能被有效抵達或者RNA部分降解等情況下，20對Z形引物對的設計保障了足夠強勁的RNA檢測。
特異性：Z形引物對的設計屏蔽了背景噪音。單一的Z形引物探針對于非目標序列的結合不能夠提供信號放大前體序列結合所需要的足夠長度，以此防止了對于非特異信號的擴增，保障了特異性。
單分子量級的可視性與定量分析： 此20x20x20x的引物設計與信號放大原理讓單一RNA分子能夠在標準的顯微鏡下以一個點狀信號的方式可視化呈現。
能夠檢測到降解了的RNA： 得益于其相對短小的目標結合區域(Z形引物對底端40到50個堿基的長度)，此Z形引物對的設計為檢測到部分降解的RNA提供了保障。
實驗方案可在6.5至8小時內完成，時間長短取決于不同的RNAscope®實驗方法。手工染色步驟只需要2至2.5小時的操作時間，更快速的完成檢測實驗。
每個點狀信號代表一個目的RNA分子，可在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下觀察。通過RNAscope®SpotStudio?軟件進行手工計算或自動圖像分析，對單個細胞中的信號進行定量分析。
RNAscope® 技術案例視頻
RNAscope® 技術檢測長鏈非編碼RNA（lncRNA）
在庫的ncRNA產品清單：
RNAscope® 技術文獻發表
