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非洲豬瘟解決方案

2021-05-10文章來源：takarabiomed



非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）是一種古老的、高度傳染的、能夠使家豬和野豬致死的病毒，2018年8月中國確診首例非洲豬瘟疫情開始，一年多的時間，非洲豬瘟已經席卷了黑龍江、江蘇、浙江、內蒙古、遼寧、山西等多個省份，給養殖業帶來了巨大損失，豬肉價格也節節攀升登上歷史高位。通過實驗室檢測，對非洲豬瘟病毒進行快速、可靠的早期診斷，對于防止疫病的傳播非常重要和必要的。根據2018年8月中國動物衛生與流行病學中心和中國動物疫病預防控制中心編制的《非洲豬瘟病毒檢測操作規程》，需要使用實時熒光定量PCR方法對非洲豬瘟病毒進行檢測。 Takara作為分子生物學試劑行業內的重要一員，多年來持續不斷地為中國各科研院校、檢驗檢疫單位和各種檢測機構提供性能穩定、高效高質量的研究用試劑，受到廣大生物學研究人員的支持和好評。Takara可以提供從探針、引物合成到定量PCR檢測的多種靈活的非洲豬瘟病毒ASFV檢測解決方案。






根據2003年發表于《Journal of Virological Methods》期刊的文獻《Development of a TaqMan PCR assay with internal amplification control for the detection of African swine fever virus》，探針法定量PCR擴增ASFV的主要免疫原基因VP72的3'保守區， PCR引物和探針序列如下表：








★ MightyPrep reagent for DNA（Code No. 9182）是用于從小鼠尾等動物組織及植物組織、血液、加工食品、土壤、菌體等中簡便、高收量的制備PCR用模板DNA的試劑。使用時在樣品中添加本試劑，僅需95℃加熱10分鐘即可簡易提取DNA。


◆ 添加試劑（MightyPrep reagent for DNA）后，僅需95℃加熱10分鐘即可簡易提取DNA。 ◆ 只有一種添加試劑！可直接使用。 ◆ 與阻害物抵抗性高的PCR試劑配套使用，可對寬廣范圍內的樣品進行PCR擴增。



推薦閱讀：樣本DNA的快速簡易提取

★ Probe qPCR Mix（Code No. RR391A）是采用探針法進行Real Time PCR（qPCR）檢測的試劑。通過對添加了抗體的Hot Start PCR酶和Real Time PCR用Buffer分別進行了改良，實現了PCR阻害物抵抗性高、擴增特異性高、擴增效率高、檢測靈敏度高。


各種PCR阻害物對Ct值的影響評價
已知血紅素（血液成分）、腐植酸（土壤成分）、黑色素（皮膚和毛發成分）、單寧酸（植物成分）對PCR反應有很強的阻害作用，對在PCR反應中添加PCR阻害物的反應體系和未添加PCR阻害物的反應體系進行了Ct值比較。本制品同其他公司同類制品相比，對PCR阻害物的抵抗性顯著提高，使用目前為止不能獲得良好反應結果的檢測樣品也能夠期待獲得高成功率、高檢測靈敏度的PCR反應。



推薦閱讀：阻害物高抗性的探針法qPCR Mix



★ TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 (Code No. 9766)是專門用于從血漿、全血、無細胞體液、病毒原液和感染病毒的組織中提取各種病毒 (Virus) RNA/DNA的小量純化試劑盒，具有高效、快速、方便之特點，病毒裂解后，提取操作僅需20分鐘便可完成。

*★ Premix Ex Taq? (Probe qPCR)（Code No. RR390）是采用探針法進行Real Time PCR (qPCR) 反應的專用試劑，可用于快速PCR。Premix Ex Taq*是一種2×濃度的Premix Type試劑，進行實驗時，PCR反應液的配制十分方便簡單。

Mix中添加了Tli RNaseH (耐熱性RNaseH)，以cDNA 作為模板進行PCR反應時，可以很好地抑制由于cDNA中殘存mRNA對PCR反應造成的阻害作用。本制品可以在寬廣的定量區域內得到良好的標準曲線，對靶基因進行準確定量、檢測，重復性好，可信度高。




★ PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix (or with UNG)（Code No. RR650/RR651）是基于探針法檢測的一步法Real Time RT-PCR試劑。本制品為2× premix型試劑，只需添加用于檢測目的基因的引物、探針和模板即可進行反應。由于本制品在反應液中能夠直接從生物樣本中提取核酸，對于含有RNA病毒等的生物樣品，可直接添加到反應液中進行Real Time PCR反應。由于核酸提取、反轉錄、qPCR各反應連續進行，大大提高了操作簡便性，減少了反應時間。


活體樣品起始簡便快速進行Real Time PCR檢測

	探針法one step RT-qPCR premix試劑

	血液、尿液等樣品無需RNA純化也可進行Real Time PCR

	通過UNG的作用，可以有效防止carryover contamination產生的假陽性 ※ 使用PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix，with UNG（Code No. RR651）時通過UNG的作用，可以有效防止carryover contamination產生的假陽性




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