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Code No.
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產(chǎn)品名稱
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630491
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Matchmaker® Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System
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630496
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Matchmaker® Insert Check PCR Mix 1
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■ 制品說明
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酵母單雜交系統(tǒng)—Matchmaker Gold
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Clontech Matchmaker Gold酵母單雜交（Y1H）文庫篩選系統(tǒng)為鑒定蛋白質(zhì)-DNA相互作用提供了簡便高效的方法。所有的Matchmaker Gold系統(tǒng)均采用篩選強(qiáng)度較高的Aureobasidin A（AbAr）抗生素報(bào)告基因。這種新型的報(bào)告子可以高效殺死非抗性克隆，從而大大降低了背景克隆的生長。
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Matchmaker Gold酵母單雜交系統(tǒng)
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在Matchmaker Gold酵母單雜交系統(tǒng)中，目標(biāo)/bait DNA序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到pAbAi報(bào)告載體上。用同源重組的方法將攜帶bait的pAbAi載體整合到Y(jié)1HGold酵母基因組中，用于后續(xù)文庫的篩選。
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一步法構(gòu)建和篩選文庫
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在文庫中，可能與bait DNA序列相互作用的prey蛋白的cDNA與GAL4 AD融合表達(dá)，文庫通過SMART技術(shù)與同源重組技術(shù)直接構(gòu)建于Y1HGold[Bait-AbAi]報(bào)告菌株中。當(dāng)prey蛋白與bait序列結(jié)合時(shí)，相應(yīng)的GAL4 AD會(huì)激活A(yù)bAr的表達(dá)，酵母可在添加了AbA的培養(yǎng)基上生長。在文庫篩選中，編碼prey蛋白的質(zhì)粒可以較容易地從酵母克隆中分離出來進(jìn)行后續(xù)的驗(yàn)證分析。
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快速獲得結(jié)果！
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Matchmaker Gold 單雜交文庫篩選過程直接、快速、簡單！
第一步：將1-3個(gè)目標(biāo)DNA序列（bait）重復(fù)串聯(lián)后克隆到pAbAi中。
第二步：將線性化的pBait-AbAi載體整合到Y(jié)1HGold酵母基因組中，獲得攜帶bait的酵母菌株，
并在SD/-Ura培養(yǎng)基上篩選。
第三步：利用Insert Check PCR Mix 1，通過PCR對整合到酵母基因組的bait DNA序列進(jìn)行驗(yàn)證分析。
第四步：利用SMART技術(shù)合成與線性化的pGADT7-Rec末端具有相同序列的Prey蛋白的cDNA。
第五步：將合成的cDNA和線性化的pGADT7-Rec共轉(zhuǎn)化到上述Y1HGold bait菌株中構(gòu)建文庫，同
時(shí)利用AbA選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
第六步：收集獲得的陽性克隆，并用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2對文庫中的插入片段進(jìn)行分析。
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菌落PCR分析
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在Y1H及Y2H篩選中，菌落PCR是分析bait菌株并對陽性克隆進(jìn)行分類的簡便、快速的方法。用Matchmaker Insert Check PCR Mix 1可以驗(yàn)證整合到Y(jié)1H酵母基因組的bait DNA序列，用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2可以快速分析單雜及雙雜篩選中陽性克隆子的插入片段。
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酵母單雜交培養(yǎng)基
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我們的酵母單雜交培養(yǎng)基套裝里包含有配套于Clontech Matchmaker Gold One-Hybrid操作中所用到的全套的培養(yǎng)基。
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■ 制品特點(diǎn)
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1. 表現(xiàn)較好的酵母單雜交系統(tǒng)
2. AbA抗性篩選大大消除背景克隆
3. 在酵母體內(nèi)直接完成文庫構(gòu)建和篩選
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產(chǎn)品詳情請點(diǎn)擊以下鏈接：
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http://www.clontech.com/CN/Products/Protein_Interactions_and_Profiling/Yeast_
OneHybrid/Matchmaker_Gold_Yeast_One-Hybrid_System?sitex=10022:22372:US
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