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■ 制品說明
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酵母雙雜交載體
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pGBKT7是酵母雙雜交bait表達載體，旨在表達GAL4 DNA結合結構域（DNA-BD, 1-147 aa）與bait蛋白質的融合蛋白質。融合蛋白質在ADH1啟動子下高水平表達，同時融合蛋白質含有一個c-Myc表位標簽。為了促進體外轉錄和翻譯，在pGBKT7的GAL4 DNA-BD和表位標簽之間添加了T7啟動子 。
· pGADT7 ——酵母雙雜交 Prey 載體
pGADT7是酵母雙雜交表達載體，旨在表達GAL4激活結構域（AD, 768-881 aa）與目的蛋白質的融合蛋白質。融合蛋白質在全長ADH1啟動子下高水平表達，同時融合蛋白質含有一個血凝素（HA）表位標簽。為了促進體外轉錄和翻譯，在pGADT7的GAL4 AD和表位標簽之間添加了T7啟動子（1,2）。
· pBridge ——三雜交bait載體
pBridge載體與基于GAL4的雙雜交系統組合，可以用于研究三個蛋白質之間的相互作用。在Matchmaker Gold系統中，pBridge相當于替代了pGBKT7。由于它的兩個不同的多克隆位點，pBridge載體可以表達一個DNA-BD融合蛋白質和另一個在bait和prey之間起“Bridge”作用的蛋白質。
與標準雙雜交分析相比，三雜交系統更有可能用于研究更加復雜的蛋白質之間的互作。系統中的第三個蛋白質可以通過多種方式參與互作：
1. 作為橋梁，連接兩個原本沒有直接互作的蛋白質，使它們發生互作。
2. 穩定兩個蛋白質之間的弱相互作用。
3. 修飾或抑制一個或兩個蛋白質（3）。
4. 抑制雙雜交互作。
額外蛋白質的表達受甲硫氨酸誘導型啟動子調控——甲硫氨酸不存在的條件下蛋白質才能夠表達。蛋白質的表達與否由外源培養基中是否含有甲硫氨酸決定，而第三個蛋白質的表達效應則由報告基因或營養標記基因的表達來指示。我們提供的酵母培養基（Code. No：630430 &630429）缺少甲硫氨酸，非常適用于攜帶pBridge載體的酵母菌株。
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■ 制品特點
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1. 非常受歡迎并被廣泛使用的酵母雙雜交載體。
2. pGBKT7和pGADT7是Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System的組分。
3. pBridge表達雙雜交之外的第三個蛋白質。
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■ 制品用途
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1. 酵母雙雜交篩選
2. 酵母三雜交篩選
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■ 文獻
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1. Tirode, F. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:22995–22999.
2. Brachmann, R. & Boeke, J. (1997) Curr. Opin. Biotechnol. 8:561–568.
3. Osborne, M. et al. (1995) Biotechnology 13:1474–1478.
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