本制品是采用TB
Green嵌合熒光法進(jìn)行One Step RT-PCR反應(yīng)的專用試劑。使用本制品進(jìn)行Real Time
RT-PCR反應(yīng)可在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單，并能有效防止污染。本反應(yīng)體系由于可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，大大提高了檢測(cè)靈敏度，并省略了PCR反應(yīng)后的電泳步驟，非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測(cè)。
本制品中使用了適合于Real Time RT-PCR的反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript RTase和具有高擴(kuò)增效率和高擴(kuò)增特異性的TaKaRa Ex Taq HS，能進(jìn)行穩(wěn)定的Real Time One Step RT-PCR反應(yīng)。
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■ 保存
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-20℃。
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2X One Step TB Green RT-PCR Buffer Ⅲ 請(qǐng)于-20℃避光保存。
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■ 試劑盒特長(zhǎng)
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1. 進(jìn)行Real Time One Step RT-PCR反應(yīng)，可以快速、準(zhǔn)確地對(duì)RNA病毒等微量RNA 進(jìn)行分析。
2. PCR用DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS，可以進(jìn)行Hot
Start法PCR反應(yīng)，再與Takara公司特別開(kāi)發(fā)的Buffer系統(tǒng)相結(jié)合，具有高擴(kuò)增效率，高擴(kuò)增靈敏度之特點(diǎn)。2X One Step TB
Green RT-PCR Buffer III中預(yù)先混有TB Green等，反應(yīng)液配制十分簡(jiǎn)單方便。
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■ 使用注意
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1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次Real Time One Step RT-PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、各種酶等)，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)樣品之間產(chǎn)生的誤差。
2. 使用TaKaRa Ex Taq HS、PrimeScript RT enzyme Mix Ⅱ時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。
3. 2X One Step TB Green RT-PCR Buffer Ⅲ 融解后如有不溶物請(qǐng)充分混合。
4. 反應(yīng)液的配制、分裝請(qǐng)一定使用新的 (無(wú)污染的) 槍頭、Microtube等，盡量避免污染。
5. 制品只能使用特異性反轉(zhuǎn)錄引物，不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
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