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■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR02AG)
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Code No.:RR02AG
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TaKaRa LA Taq
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125 U
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2×GC Buffer I (5 mM Mg2+ Plus)*
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1.25 ml
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2×GC Buffer II (5 mM Mg2+ Plus)*
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1.25 ml
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dNTP Mixture (各2.5 mM)
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400 μl
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Code No.:RR52AG
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TaKaRa LA Taq (5 U/μl)
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25 μl
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2×GC Buffer I (5 mM Mg2+ Plus)*
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1.25 ml
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2×GC Buffer II (5 mM Mg2+ Plus)*
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1.25 ml
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* 請(qǐng)先使用Buffer I，當(dāng)使用Buffer I 不能擴(kuò)增時(shí)，再試用Buffer II。
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■ 制品說(shuō)明
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本制品是應(yīng)用LA PCR原理研制的具有3′→5′Exonuclease活性 (Proof reading活性) 的耐熱性DNA聚合酶。無(wú)論是擴(kuò)增短鏈DNA還是長(zhǎng)鏈DNA，其效率都優(yōu)于其它同類(lèi)產(chǎn)品，尤其在擴(kuò)增大于10 kb的DNA片段方面，其優(yōu)勢(shì)更加明顯，而且保真性能強(qiáng)。當(dāng)擴(kuò)增具有復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu) (GC rich等) 的模板或具有重復(fù)序列的模板時(shí)，使用GC Buffer進(jìn)行PCR擴(kuò)增將非常有效。GC Buffer可以單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)。
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■ 保存
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-20℃。
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■ 活性定義
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用活性化的大馬哈魚(yú)精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位 (U)。
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■ 純度
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25 U的本酶和1 μg的Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反應(yīng)1小時(shí)，未檢出內(nèi)切酶和外切酶活性。
25 U的本酶和1 μg的λ-Hind III、或1 μg的λ DNA在74℃下反應(yīng)16小時(shí)，均未檢出內(nèi)切酶和外切酶活性。
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■ PCR產(chǎn)物
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使用本制品擴(kuò)增得到的大部分PCR產(chǎn)物3’端附有一個(gè)“A” 堿基，因此可直接克隆于T-Vector中。但克隆片段過(guò)長(zhǎng) (大于5 kb)，TA克隆效率將會(huì)降低。也可以將PCR產(chǎn)物進(jìn)行末端平滑化和磷酸化后克隆到平滑末端載體中。
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■ 用途
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PCR法擴(kuò)增DNA。適用于高GC含量或含有重復(fù)序列片段的擴(kuò)增。
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■ PCR反應(yīng)性能
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1. 以人基因組DNA為模板，可很好地?cái)U(kuò)增17.5 kb (β-Globin gene) 的DNA片段 (使用GC Buffer I)。
2. 以人基因組DNA為模板，可很好地?cái)U(kuò)增c-jun proto oncogene 1,255 bp (GC含量65%) 的DNA片段 (使用GC Buffer I，II)。
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