我們的Guide-it in vitro transcription and screening kits for sgRNA 包括四個試劑盒，用于CRISPR/Cas9 研究中單鏈向導RNAs(single guide RNAs ,sgRNAs)的簡單制備、清理和評價。每個試劑盒提供足夠 50次反應的材料。
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 被用于通過體外轉錄制備大量的 sgRNAs。這個試劑盒同樣包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638), 被用于快速純化參與體外轉錄（vitro transcription，IVT) 反應的sgRNA。從這個試劑盒純化后的 sgRNA 可以直接被用于轉染、電穿孔以及體外剪切實驗。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639) 可以在Cas9介導的基因編輯相關研究前，先在體外檢測不同sgRNAs的效率，這樣就不必浪費時間將無效的sgRNAs轉入您的細胞了。使用這個試劑盒，首先通過PCR產(chǎn)生包含sgRNA靶點的模板，隨后再與您想測試的sgRNA以及重組Cas9核酸酶結合。Cas9 核酸酶剪切模板的效率可以通過使用瓊脂糖凝膠電泳檢測。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636) 包含以上提到的全部試劑盒組分，可以被用來合成和檢測sgRNAs效率。該試劑盒包含了用于體外轉錄和純化sgRNAs，以及檢測重組Cas9核酸酶對PCR靶向片段剪切效率的所有試劑。
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■ 產(chǎn)品特點
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· 共有4個試劑盒，可用于Cas9介導的基因編輯研究中sgRNA (single guide RNA)的簡單制備、清潔以及效率評價。
· Lenti-X Packaging Single Shots易于產(chǎn)生高滴度病毒。
· 使用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit, Code No. 632638)體外轉錄和純化大量sgRNA，用于轉染或體外篩選。
· 使用Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638) 對IVT 反應后sgRNA的快速純化，直接用于轉染、電穿孔以及體外剪切試驗。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)包含高質量的重組Cas9蛋白質。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636)是Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit (Code No. 632635) 和 Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)的組合，允許您進行sgRNA制備和對預設靶點體外剪切能力的測試。
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■ 實驗例
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圖1. Guide-it sgRNA In Vitro Transcription and Screening System試劑盒組成和操作流程
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圖2. 采用Guide-it試劑盒制備高產(chǎn)量single guide RNA (sgRNA)和重組Cas9蛋白質剪切靶位點檢測sgRNA剪切效率操作步驟概要
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圖3. Guide-it試劑和同類產(chǎn)品所制備的sgRNA品質比較
采用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制備的所有sgRNAs均為單一條帶，而其他公司同類產(chǎn)品制備的sgRNAs均可觀察到雜帶，因此Guide-it試劑盒所制備的sgRNAs品質更高。
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* 比較結果來自于Takara Bio USA, Inc.
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圖4. 以不同基因為靶標制備的sgRNA產(chǎn)量和品質比較
采用Guide-it Complete sgRNA Screening System以多個基因為靶基因制備sgRNA。
Panel A. 將20 μl sgRNA體外轉錄（IVT）反應液置于37°C孵育4 hr，采用NanoDrop分光光度計檢測所制備產(chǎn)生的sgRNA產(chǎn)量。
Panel B. 采用安捷倫生物分析儀分析分析每一個sgRNA IVT反應液，檢測sgRNA質量。
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■ 產(chǎn)品組份
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Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 50 rxns)
· 1 each Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Components v2 (Code No. 632637; 50 rxns; Not sold separately)
○ 50 μl Guide-it Scaffold Template (1 ng/μl)
○ 350 μl Guide-it In Vitro Transcription Buffer
○ 1 ml RNase Free Water
○ 500 μl RNase Free Water
○ 150 μl Guide-it T7 Polymerase Mix (33 U/μl)
○ 625 μl PrimeSTAR Max Premix (2X)
○ 100 μl Recombinant DNase I (RNase-Free) (5 U/μl)
· 1 each Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
○ 13 ml RNase Free Water
○ 3 ml IVT Binding Buffer
○ 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
○ 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
○ 50 Collection Tubes (2 ml)
Guide-it sgRNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
· 13 ml RNase Free Water
· 3 ml IVT Binding Buffer
· 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
· 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
· 50 Collection Tubes (2 ml)
Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639; 50 rxns)
· 25 μl Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease (500 ng/μl)
· 50 μl 15X Cas9 Reaction Buffer
· 50 μl 15X BSA
· 5 μl Control sgRNA (50 ng/μl)
· 25 μl Control Fragment (20 ng/μl)
· 50 μl Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)
· 1.25 ml 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
· 5 ml RNase Free Water
· 5 ml Extraction Buffer 1
· 0.5 ml Extraction Buffer 2
Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636; 50 rxns)
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635)
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)
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Code No.
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Product
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632635
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Guide-it? sgRNA In Vitro Transcription Kit
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632636
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Guide-it? Complete sgRNA Screening System
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632638
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Guide-it? IVT RNA Clean-Up Kit
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632639
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Guide-it? sgRNA Screening Kit
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■ 關聯(lián)資料
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