技術與服務
Technology service1、 酵母單雜能不能用mating的方法？
不能，因為Y1HGold和Y187都是α型，不能融合生長。
2、 細胞質蛋白用哪種方法篩庫？
可以用核體系也可以用膜體系，最好用膜體系。
3、 共轉是把AD轉到帶有BD的Y2HGold還是BD、AD一起轉到Y2HGold?
都可以,如果是AD轉到帶有BD的酵母菌用SD-trp的培養基搖菌。
4、 篩到的蛋白經測序后，從AAA AAA后翻譯的結果有好多都移碼？
三框文庫不是不移碼，而是保證您的文庫中的每個基因的克隆都至少有一種不移碼的情況存在，即您的文庫表達的目的蛋白中總有正確的蛋白存在。 所以出現移碼情況需要分析測序峰圖而不是只看測序結果，也許峰圖上有某個位點缺失導致序列移碼，這種情況需要手動調整序列。理論上肯定只有不移碼的基因才會被篩選出來。
5、如果誘餌蛋白對酵母細胞是有毒的，該怎么辦？
在某些情況下，在液體培養基中培養不好的菌珠可以在固體培養基上生長得很好。首先重懸克隆于1ml的SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于5 個100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每塊板上的克隆，并收集到一管中，這樣就可以使用這個細胞重懸液進行正常的雜交反應。
6、如果誘餌蛋白能直接激活報告基因的表達，該如何處理？
該蛋白很可能有轉錄激活域，是個轉錄因子?？梢酝ㄟ^基因重組切掉轉錄激活域，然后重新檢測其是否自激活，但要注意重組也有可能破壞蛋白之間的互作。
7、轉化效率太低怎么辦？
可以采用以下方法解決：
1) 檢測一下DNA的純度，如果可以的話，重新用乙醇純化。
2) DNA-BD/誘餌蛋白很可能是有毒的。
3) 不適當的培養基，重新配制培養基，并做對照轉化。
4) 檢測pGBT9對照載體的轉化效率，放置于SD/–Trp平板上，轉化效率應該在1 x 105 colonies/ug DNA以上。
8、雜交效率不高，該如何處理？
在雜交中，預轉化的誘餌細胞的數量可能不夠。當對誘餌菌株進行液體培養過夜時，應挑選大的、新鮮的克隆進行培養，經過離心和重懸后，再使用血球計對細胞進行計數。密度應該在1 x 109/ml。
一個甚至兩個融合蛋白對酵母細胞有毒。你可以通過重組方法來減輕毒性，同時又能保證蛋白的相互作用?；蛘呤褂帽磉_水平較低的載體。也可以在瓊脂平板或濾膜上進行雜交。但同時必須作雜交對照實驗。
9、四缺板上篩選到的陽性克隆可以直接拿菌液或酵母質粒去測序嗎？
不行，因為酵母質?？截悢档?，達不到測序濃度，所以需要將抽出的質粒轉到大腸桿菌再測序。
10、膜系統酵母雙雜文庫如何選擇BD載體？
膜系統酵母雙雜根據誘餌基因的蛋白跨膜方式選擇不同的載體，可以根據如下網站預測蛋白結構進行選擇：
http://www.ebi.ac.uk/Tools/pfa/phobius/
http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/
上面的這兩個網站可以分析膜蛋白的細胞內和細胞外區域。
http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/
這個網站可以具體分析蛋白的信號肽序列，以及N端是否存在cleavge site。
確定誘餌基因的蛋白結構以后根據如下表格選擇適當的載體：
